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简述信息一览：

• 1、RNA干扰的制备方法

RNA干扰的制备方法

1、“酶切-连接”方法是通常构建RNA干扰载体最常用的方法，被广泛应用于各种生物之中。其构建过程是：通过PCR方法得到目的基因的片段（添加了合适的酶切位点），使之正反相连形成顺式片段和反式片段。

2、引入BamHⅠ-SmaⅠ位点，得到小片段S，正向插入上述反义表达载体，得到RNAi表达载体p35S∷L（A）-S-GUS-tNOS，预计转录后将形成一个RNA茎环结构并诱导目的基因产生RNAi---举个例子。酶切位点应该添加到上下游引物的5‘端，不知道你加错没有。

3、在vigs基因沉默中，RNA干扰可通过合成siRNA来特异性地抑制目标基因。这一过程可以通过体内合成siRNA的方式实现，也可以通过体外合成siRNA并引入到细胞中的方式实现。在细胞内，合成的siRNA会与靶基因的mRNA相结合并引发其降解，从而达到沉默目标基因的效果。

4、两种对照，主要是为了解决off-target效应，选做一种即可，一般建议选5，涉及的实验即所谓的“RNA干扰回复实验”， 一般应该从mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平三个层次来检测干扰效率。

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